La thermophorèse à micro-échelle (MST pour l'anglais Micro-Scale Thermophoresis) est une méthode qui permet l'analyse quantitative d'interactions moléculaires en solution, sans immobilisation d'un partenaire et avec de faibles quantités d’échantillons (µL). La technique est efficace aussi bien avec les tampons classiques qu'avec les liquides biologiques comme le sang ou les lysats cellulaires. Elle fournit avec une grande précision des informations sur les constantes d’affinité pour une gamme se situant entre le nM et le mM.
La technique est fondée sur le mouvement dirigé de molécules dans un gradient de température très localisé (2°C) créé par un laser infrarouge. La mobilité des molécules est très sensible à tous les types d'interactions induisant des changements de propriétés moléculaires tels que la taille, la charge, la solvatation ou la conformation. La détection est réalisée par fluorescence. Seul un des partenaires nommé "cible" doit être fluorescent (kits de marquage par fluorescence).
Equipement
Nanotemper Monolith NT.115
Analyse en capillaires (volume à préparer 20 µL)
Lampe Bleue (excitation/émission 470/520 nm) et Rouge (excitation/émission 625/680 nm)
Greffage des fluorochromes sur les protéines par couplage aux lysines, aux cystéines ou étiquettes HisTag.
